Горки для посуды в гостиную: Купить витрины для посуды в гостиную. Витрины для гостиной| Выгодная цена

Надставки для обеденного стола позволяют легко расширить обеденный стол для праздничных застолий, ярких игровых вечеров или больших проектов.Надставки экономят место, заправляя или складывая их на столе, или храня, когда они не нужны. Имея на выбор четыре основных типа, легко выбрать обеденный стол на заказ с правильными надставками в соответствии с вашими потребностями.

Расширения для обеденного стола: четыре основных типа

• Традиционный
• Лист бабочки
• Выпадающий лист
• Уложенный лист

Традиционные

• Концы стола раздвигаются, образуя зазор в центре.
• Удлинители стола (называемые створками) помещаются в центральный зазор.
• Некоторые обеденные столы позволяют хранить традиционные надставки в столе под столешницей.
• Для установки традиционных расширений может потребоваться два человека.

Обеденный стол Amish Christy Extension включает одну 18-дюймовую створку, которая хранится отдельно от стола.

Стол с эстакадой для королевской миссии амишей включает в себя традиционные надставки, которые самостоятельно хранятся в столе.

Вариант: Вариант традиционных удлинителей стола позволяет добавлять листья ближе к концу стола вместо середины для облегчения доступа и сохранения центра стола как единое целое.

Обеденный стол Carlisle в деревенском стиле с ершами предлагает вариант традиционных надставок стола, позволяющий добавлять надставки на макетные платы на концах стола.

Совет: Если традиционные удлинительные створки стола не складываются самостоятельно, держите их как можно ближе к столу, чтобы влажность не вызывала их разбухание с разной скоростью, что может повлиять на посадку.

Увеличьте ваш стол с помощью надставок «бабочка»

• Концы стола раздвигаются, образуя зазор в центре, как у традиционных удлинителей стола.
• Лист бабочки складывается пополам для более компактного хранения.
• Листья бабочки часто прикрепляют к столу и хранят под столешницей.
• Для этого удлинителя требуется больше движущихся частей, которые со временем могут ухудшиться из-за ржавчины или разбухания древесины.

Стол Amish Vancouver Trestle Table — это стол для торжеств с двумя 18-дюймовыми надставками в виде бабочек, которые хранятся под столешницей.

Расширения Divine Drop Leaf

• Наружные концы обеденного стола складываются для экономии места.
• Популярный из-за простоты использования.
• К столу прилагаются расширения.
• Разгибания могут повлиять на пространство для ног в сложенном положении.
• Не такой прочный, как другие варианты.

Обеденный стол Amish Renwick Gateleg действительно экономит пространство с расширениями откидной створки, включенными в его современный дизайн.

Удлинители створок для экономии места

• Удлинители удобно размещаются под краями стола.
• Легко установить удлинители на место.
• Позволяет расширениям расширяться и сжиматься с остальной частью таблицы.
• Обеспечивает долговечность и прочность даже на концах стола.
• Неповторимый вид, создающий двойной слой столешницы, в котором складываются надставки.

Удлинительный обеденный стол Stowleaf Draw Amish Farmhouse — идеальный фермерский стол для кухни или столовой в доме или квартире.

Вступая в передачу

Есть три типа слайдов, которые помогают открывать и закрывать таблицы с расширениями.

Направляющие для обеденного стола: три основных типа

• Деревянные горки
• Металлические направляющие
• Направляющие на шарикоподшипниках

Деревянные горки

• Никогда не ржавеет.
• Может создавать пыль.
• Для скольжения может потребоваться больше усилий.

Металлические направляющие

• Использование шестерен позволяет одному человеку открыть стол с одного конца.
• Металлические шестерни обеспечивают более плавное движение.

Направляющие на шарикоподшипниках

• Лучший выбор для сверхплавного движения.
• Изготовлен из высококачественной стали на шарикоподшипниках для плавной и бесшумной работы.

Наш новый видеоролик «Основное руководство по расширению стола» демонстрирует и объясняет, как работают четыре основных типа расширения стола, чтобы помочь вам найти то, что подходит для вашего дома.

Мебель, изготовленная амишами, предлагает множество вариантов. Теперь, когда у вас есть блюдо на надставках для обеденного стола, вы можете найти обеденный стол, который вам подойдет.

камер для визуализации живых клеток | Nikon’s MicroscopyU

Камеры для образцов — неотъемлемая и важная ветвь истории были опубликованы изображения живых клеток и широкий спектр дизайнов на протяжении многих лет описывая системы, которые предлагают отличные оптические свойства, позволяя поддерживать образцы в различных количествах времени.Начиная с простого приготовления запечатанного покровное стекло на предметном стекле микроскопа в сложные перфузионные камеры которые позволяют строго контролировать практически все переменные среды, камеры для культивирования предназначены для того, чтобы позволить живым образцам наблюдается с минимальным вторжением при высоком разрешении.

Независимо от конструкции камеры для визуализации живых клеток должны удовлетворять ряду требований, чтобы их можно было успешно использовать в экспериментах.Камера должна быть легко стерилизована и полностью изолирована от лабораторной среды с помощью крышки или пломбы во время наблюдения, чтобы свести к минимуму воздействие источников загрязнения. С другой стороны, камера для культивирования также должна обеспечивать несложный доступ к клеткам, если исследование включает в себя микроинъекцию, добавление реагентов (таких как лекарства или метаболиты), физические манипуляции с клетками или изменения культуральной среды. Если эксперимент с живыми клетками сопровождается клонированием или фиксацией и окрашиванием культуры синтетическими флуорофорами или иммунофлуоресценцией после сеанса визуализации, камера должна быть настроена так, чтобы позволить удаление покровного стекла.

Размеры культуральной камеры, включая общий размер, площадь поверхности для культивирования клеток и объем среды (или буфера), омывающей клетки, являются важными факторами. В дополнение к тому, что камера для культивирования легко размещается на предметном столике микроскопа, она должна быть достаточно большой в своих боковых размерах, чтобы содержать достаточное количество клеток для тщательного отбора проб из популяции. Глубина окружающей среды должна быть минимизирована, чтобы обеспечить максимально возможное оптическое качество проходящего света и доступность клеток, но при этом она также должна быть достаточно глубокой, чтобы обеспечить здоровую среду.Следует избегать использования пластиковых покровных стекол из-за присущей им автофлуоресценции и двойного лучепреломления деформации, которые мешают некоторым режимам визуализации. Следует использовать только покровные стекла самого высокого качества, которые следует очистить сильной кислотой или щелочью и тщательно промыть. Камеры для коммерческих культур различаются по надежности, универсальности и стоимости. Эти факторы следует учитывать при планировании экспериментов, чтобы определить, требуется ли одна сложная (и часто дорогая) камера или достаточно большего количества простых чашек для культивирования.В конечном итоге следует признать, что не существует идеальной камеры для культивирования для всех целей, и для достижения успеха в визуализации живых клеток часто требуется много компромиссов.

Две коммерческие высокопроизводительные камеры для инкубации и перфузии для визуализации живых клеток показаны на рисунке 1. Система открытых камер на рисунке 1 (a) предназначена для использования с 35-миллиметровыми чашками Петри, имеющими покровное стекло, прикрепленное к основанию. и оснащен тепловым насосом Пельтье для регулирования рабочей температуры в диапазоне от -5 до 50 градусов Цельсия.Несколько вариантов перфузионных систем обеспечивают непрерывную перфузию при постоянной температуре, прерывистую перфузию, статическую инкубацию питательной среды (без перфузии) или введение быстрых изменений температуры посредством перфузии. Высота жидкости в камере регулируется с помощью винтового механизма, соединенного с всасывающим отверстием, который устраняет колебания жидкости во время обмена средой. Камера также оборудована одноканальным патч-зажимом, соединенным с покрытой тефлоном лункой, имеющей электрод из хлорида серебра, чтобы сформировать солевой мостик в электрофизиологических экспериментах, требующих низкого уровня шума.Поток газа через верх камеры обеспечивает улучшенную однородность температуры и контроль pH. Система с закрытой камерой, представленная на Рисунке 1 (b), содержит уникальную перфузионную систему с двойной ролью, в которой ламинарный поток создается за счет контролируемого потока среды через стеклянное предметное стекло (называемое микроакведук ), которое также покрыто электрически проводящая и прозрачная тонкая пленка оксида индия-олова для контроля температуры. Эта система может работать при скоростях потока от статического до быстрого обмена средой с низким сдвигом поверхности ячеек в диапазоне температур от окружающей среды до 50 градусов Цельсия.И бикарбонатный, и органический буферы совместимы с камерой, которая подключена к автономному блоку контроллера.

Историческая перспектива

Первые камеры для визуализации живых клеток были спроектированы и построены вскоре после того, как в начале двадцатого века были разработаны методы культивирования клеток млекопитающих. В большинстве этих ранних камер использовался фитиль для управления потоком среды через стеклянные сосуды или пробковые корпуса со стеклянными окнами. В конце концов, было построено несколько камер роста перфузионного типа с намерением использовать их для долгосрочной визуализации с использованием световых микроскопов, доступных в тот период.К 1950-м и 1960-м годам были разработаны более сложные камеры для визуализации живых клеток для исследований с высоким разрешением, которые включали в себя новейшие методы фазовой и дифференциально-интерференционной контрастной микроскопии ( DIC ). После того, как в конце 1960-х — начале 1970-х годов были усовершенствованы доступные методы и соединители для сопряжения кинопленочных камер с микроскопом, исследователи смогли систематически исследовать живые клетки в покадровых экспериментах с высоким пространственным и временным разрешением, используя все более сложные камеры для визуализации.

Камеры визуализации, разработанные в 1970-х и 1980-х годах, основывались на стандартной конструкции, включающей размещение двух покровных стекол, разделенных парой резиновых уплотнительных колец или аналогичных прокладок, в держатель, сделанный из двух металлических пластин. Этот общий мотив, который страдает рядом подводных камней, включая невозможность замены культуральной среды или добавления отмеренных аликвот лекарств или метаболитов, преобладал в течение многих лет.В конечном итоге были сконструированы более совершенные перфузионные камеры путем изменения этой базовой конструкции, чтобы обеспечить непрерывное добавление свежей питательной среды и периодическое добавление других реагентов. Однако основным недостатком многих из этих ранних конструкций камер было отсутствие внимания к ламинарному потоку, процессу, в котором образование химических градиентов сводится к минимуму за счет плавного перехода при замене среды. Ламинарный поток гарантирует, что два раствора не будут смешаны из-за турбулентности во время процесса замены, чтобы избежать образования химических градиентов.Постоянное развитие как простых, так и сложных камер формирования изображений в течение последних нескольких лет привело к созданию превосходных конструкций, отвечающих требованиям большинства сценариев визуализации.

Несколько камер для визуализации живых клеток, которые были первоначально разработаны в конце 20-го века, показаны на рисунке 2. Варианты этих камер коммерчески доступны, и производные конфигурации были созданы в ряде лабораторий. Камера, изображенная на рис. 2 (а), является версией второго поколения оригинальной конструкции Роберта Дэй Аллена и Эндрю Баджера и предназначена для использования в перфузионных экспериментах с вертикальным микроскопом.Выпускное отверстие большого диаметра снижает вероятность растрескивания покровного стекла, а камеру можно легко модифицировать для адаптации к инвертированному инструменту для культивирования тканей. Несмотря на относительно дешевизну в изготовлении, эта камера не обеспечивает идеальных характеристик ламинарного потока. Тип камеры Дворжака-Стотлера, представленный на рис. 2 (b), который имеет круглые покровные стекла и прокладки, периодически становится коммерчески доступным несколькими производителями, но также относительно прост в изготовлении.При скорости перфузии 1 миллилитр в час камера Дворжака-Стотлера создает чистый, широкий узор потока по поверхности покровного стекла. Рисунок 2 (c) представляет собой перспективный чертеж сложной перфузионной камеры, разработанной в начале 1950-х годов, которая первоначально была фрезерована из полированного оргстекла. Обеспечивая возможность просмотра образцов с высоким разрешением при непрерывной перфузии, недостатком этой конструкции является отсутствие удовлетворительных характеристик ламинарного потока. Камеры, представленные на рисунке 2, представляют собой лишь некоторые из множества конструкций, появившихся в литературе за последние 50 лет.

Сегодня коммерчески доступен широкий спектр камер для визуализации живых клеток, от простых конструкций, установленных на предметных стеклах микроскопа, до сложных систем, способных контролировать практически все аспекты окружающей среды. Хотя многие исследователи (особенно те, кто имеет доступ к механическому цеху) продолжают изготавливать специализированные камеры, отвечающие конкретным требованиям их экспериментов, широкий спектр коммерческих камер теперь отличается улучшенным ламинарным потоком, полимерной конструкцией и возможностями высокого разрешения в одноразовых устройствах, которые можно приобрести по разумной цене.Как подчеркивалось, наиболее важным аспектом конструкции любой культуральной камеры является возможность гарантировать и проверить, что клеточные культуры здоровы и претерпевают рост в нормальном временном масштабе, а также обеспечение адекватного оптического окна для микроскопа, чтобы гарантировать, что изображение культуры может проводиться при достаточно высокой числовой апертуре, чтобы удовлетворить требования к разрешающей способности эксперимента.

Простые камеры для визуализации предметных стекол и чашек Петри

Краткосрочные эксперименты по визуализации (от 20 до 30 минут или меньше) можно провести, просто прикрепив покровное стекло, содержащее прилипшие клетки, к предметному стеклу микроскопа с использованием спейсеров, чтобы предотвратить повреждение клеток (физический стресс может вызвать аутофлуоресценцию в некоторых клеточных линиях).Покровное стекло можно закрепить любым из ряда герметиков, включая расплавленную агарозу, каучуковый клей, вакуумную смазку или полезный препарат, известный как VALAP (смесь вазелина, ланолина и парафина 1: 1: 1), для обеспечения водонепроницаемости и исключения испарения культуральной среды (как показано на рисунке 3 (а)). Тонкие прокладки, вырезанные из силиконовой резины (также имеющиеся в продаже), или сломанные куски покровного стекла можно использовать в качестве разделителей, чтобы клетки не вступали в прямой контакт с предметным стеклом микроскопа (рис. 3 (b)).При сборке этих камер убедитесь, что поверхность покровного стекла, содержащая клетки, расположена лицевой стороной вниз на спейсере, и заполните пустоту между покровным стеклом и предметным стеклом физиологическим буфером (например, фосфатно-солевым буфером; PBS) или питательной средой для культивирования тканей. Закройте края покровного стекла с помощью выбранного реагента и поместите предметное стекло микроскопа на предметный столик для наблюдения. При отсутствии питательной среды и контроля температуры клетки будут нормально функционировать всего несколько минут, но этого часто бывает достаточно для получения необходимых изображений.Для кратковременного хранения без серьезного ущерба для жизнеспособности клеток слайд можно поместить в инкубатор с диоксидом углерода или на небольшой нагревательный блок рядом с микроскопом между сеансами сбора изображений. В качестве альтернативы, чтобы избежать потери буфера или питательной среды во время хранения между экспериментами, предметное стекло можно поместить в небольшую нагретую камеру влажности.

Синтетические уплотнительные кольца (рис. 3 (c)) или круглые прокладки аналогичной формы (например, армирующие выступы, используемые для трехкольцевых связующих) представляют собой удобную альтернативу плоским силиконовым прокладкам (рис. 3 (b)) и могут быть легко заменены. герметизируется любой из монтажных смесей, рассмотренных выше.Во многих случаях круглые прокладки достаточно толстые, чтобы увеличить количество среды или буфера, доступного для омывания ячеек, и снижает риск повреждения ячеек при установке. Покровные стекла, содержащие прилипшие клетки, тонкие срезы тканей, эмбрионы или небольшие неповрежденные организмы, часто могут быть легче визуализированы, если заменить стандартное слайд более толстым вогнутым предметным стеклом с одной лункой (рис. 3 (d)). Эти предметные стекла имеют толщину приблизительно 3 миллиметра (по сравнению с традиционными стеклянными предметными стеклами толщиной 1 миллиметр), что позволяет им размещать относительно глубокую (2 миллиметра) полость.Лунка содержит больший объем буфера или культуральной среды, чем может быть зажат между плоским предметным стеклом и покровным стеклом, и, как и в случае с уплотнительными кольцами, углубление с меньшей вероятностью повредит клетки во время процедуры установки. С другой стороны, толстая конструкция и изогнутые стенки несовместимы с визуализацией с высоким разрешением в режимах повышения контрастности передачи (фазовый контраст, DIC и контраст модуляции Хоффмана; HMC ). Однако на флуоресцентную визуализацию, которая основана на эпископическом освещении покровного стекла, лунка не влияет.

Простые конфигурации предметных стекол микроскопа, описанные в предыдущих параграфах, в первую очередь предназначены для использования с вертикальными микроскопами, так что клетки могут быть визуализированы через покровное стекло, а не через более толстое предметное стекло. В некоторых случаях, особенно при использовании твердого клея, установленное предметное стекло можно перевернуть и наблюдать в инвертированный микроскоп без вредных последствий. В качестве альтернативы, если доступен сухой объектив с высоким разрешением, содержащий корректирующую манжету, образец обычно можно визуализировать через нижнюю часть предметного стекла, если поправочный коэффициент аберрации объектива может компенсировать дополнительную (1-миллиметровую) толщину.Более универсальная конфигурация, подходящая как для вертикального, так и для инвертированного микроскопов, может быть получена путем сверления 1-сантиметрового отверстия в стеклянном или пластиковом предметном стекле микроскопа и закрепления покровного стекла на одной стороне с помощью лака для ногтей, силиконового герметика или более новые усовершенствованные клеи, которые можно приобрести у дистрибьюторов оборудования (как показано на Рисунке 3 (e)). «Лунка» камеры может быть заполнена культуральной средой или буфером и снабжена на верхней стороне вторым покровным стеклом, содержащим прилипшие клетки, которое временно устанавливается с помощью VALAP.Если покровное стекло аккуратно положить на полную лунку, чтобы избежать застревания пузырьков воздуха, между двумя покровными стеклами образуется оптически чистый путь. В противном случае пузыри создадут мениск, который может исказить изображения, снятые в режиме проходящего освещения. Эта конфигурация оптимизирована для использования с вертикальными микроскопами. Альтернативный метод загрузки, более подходящий для инвертированных микроскопов, включает выращивание клеток на постоянно прикрепленном покровном стекле с последующим покрытием клеток и питательной среды вторым покровным стеклом, как описано.

Имеется широкий выбор коммерческих камер для культивирования на предметных стеклах, соответствующих требованиям многих краткосрочных исследований живых клеток. Они варьируются по сложности от простых пластиковых бутылок для культивирования и многолуночных корпусов, соединенных со стеклянными предметными стеклами микроскопа, до сложных интегрированных систем, которые позволяют перфузию, манипуляции, исследования потока и быстрые анализы нескольких изолированных культур, как показано на рисунках с 3 (f) по 3. (я). Так называемая система «лаборатория на слайде» изображена на рисунке 3 (f) с многокамерной конструкцией, которая доступна в нескольких форматах, от одной большой камеры до нескольких (до 18). камеры меньшего размера на одном предметном стекле (камера на рисунке 3 (f) имеет 4 прямоугольных лунки).Эти универсальные автономные камеры снабжены неплотной пластиковой крышкой, которая позволяет газообмену, но может стать проблемой из-за мениска и двойного лучепреломления при визуализации с режимами передачи. Кроме того, газообмен, обеспечиваемый конструкцией камеры, ограничивает количество времени, в течение которого клетки могут находиться вне инкубатора с углекислым газом без повышения pH, если только предметное стекло не отображается в камере контроля окружающей среды. Могут быть получены аналогичные камеры, которые соединяются либо с 1-миллиметровыми предметными стеклами микроскопа, либо с 170-микрометровыми покровными стеклами, обе из которых предназначены для визуализации растущих клеток с помощью инвертированного микроскопа.В конце сеанса наблюдения за живыми клетками клетки можно фиксировать и окрашивать непосредственно в камере для выращивания, которую затем удаляют для установки предметного стекла или покровного стекла.

Коммерческая камера для визуализации, показанная на рисунке 3 (g), сочетает удобство культивирования клеток в чашке Петри с оптическим качеством предметного стекла микроскопа для получения изображений с высоким разрешением с использованием различных режимов контраста. Канал наблюдения, соединяющий два резервуара со средой, имеет объем 100 микролитров и ширину 5 миллиметров, что позволяет наблюдать за большой популяцией клеток.Поток по каналу можно инициировать путем заполнения одного из резервуаров. Раздвоенный канал, представленный камерой на рис. 3 (h), можно приобрести либо без покрытия, либо обработать специальными покрытиями для выращивания эндотелиальных клеток для моделирования кровеносных сосудов. Адаптеры типа Люэра на концах канала позволяют адаптироваться к перфузионным системам для точного регулирования скорости потока и напряжения сдвига. Этот тип культуральной камеры является прекрасным примером индивидуального дизайна, ориентированного на конкретные исследовательские области.Аналогичная камера, показанная на Рисунке 3 (i), предназначена для вмещения очень малых объемов (10 микролитров) при проведении анализов дифференцировки стволовых клеток, молекулярного распознавания и связывания, а также при определении констант связывания на основе флуоресценции. изображения. Каждый из пяти параллельных каналов оборудован отдельным резервуаром для среды для увеличения пропускной способности. В продаже имеется широкий спектр специализированных камер, многие из которых предназначены для экономии материалов и эффективности выполнения конкретных исследований.

В продаже имеются различные конфигурации чашек Петри, специально разработанные для получения изображений живых клеток с высоким разрешением (см. Рисунок 4). Самая простая и, возможно, самая универсальная конструкция состоит из стандартной одноразовой чашки Петри диаметром 35 или 50 мм с круглым отверстием (10, 14 или 20 мм), вырезанным в центре поверхности прикрепления и закрытым высококачественным покровным стеклом из боросиликата, чтобы позволяют наблюдать за живыми клетками с высоким разрешением (рис. 4 (а)).Камеры доступны без покрытия или покрытые тонким слоем агента, способствующего адгезии, такого как поли-D-лизин или коллаген. Эти камеры для визуализации, известные как чашки со стеклянным дном , доступны в 6-, 12- и 24-луночных версиях (рис. 4 (c)) для анализа нескольких культур. Похожая конструкция (рис. 4 (b)) представляет собой индивидуализированную чашку Петри, которая содержит большое круглое покровное стекло, охватывающее все дно модифицированной чашки. Эти чашки также доступны в различных размерах и могут быть приобретены с плотно пригнанными крышками для защиты атмосферы, в отличие от обычных чашек Петри, которые имеют неплотно прилегающие крышки для газообмена.Хотя стандартные чашки Петри из полистирола могут использоваться для рутинных наблюдений с низким разрешением (непосредственно через пластик) с объективами с большим рабочим расстоянием, имеющими корректирующие кольца, использование объективов с высокой числовой апертурой (от 1,2 до 1,4) в сочетании с масляной или водной иммерсией требует модифицированного версии со стеклянным дном.

в большинстве случаев заполнены значительно большим объемом питательной среды или буфера для визуализации, чем могут быть помещены на предметных стеклах микроскопа, показанных на рисунке 3.Увеличенные объемы среды сводят к минимуму опасность внезапных изменений температуры или pH и обеспечивают превосходную среду для роста для длительного культивирования. Еще одним преимуществом этих камер является то, что покровное стекло, слитое со дном чашки Петри, позволяет получать изображения культивируемых клеток с высоким разрешением непосредственно после переноса из инкубатора, а не потенциально вызывать травму, загружая засеянные покровные стекла или отделенные клетки в специализированную камеру для визуализации. На практике культуры, содержащие трансфицированные клетки млекопитающих (экспрессирующие флуоресцентные белки), можно многократно переносить между инкубатором с увлажненным диоксидом углерода и столиком микроскопа для периодического наблюдения или записи изображений с незначительным повреждением клеток или без него.Кроме того, растет число коммерческих послепродажных нагревательных столиков и закрытых инкубаторов для микроскопов, предназначенных для обслуживания чашек Петри с 35-миллиметровым стеклянным дном при длительной покадровой съемке.

Простые камеры для визуализации живых клеток, показанные на рисунках 3 и 4 (фактически, предметные стекла микроскопа и чашки Петри), часто можно мыть, стерилизовать и многократно использовать повторно. Первым делом необходимо тщательно очистить камеру моющим средством, затем тщательно промыть деионизированной или дистиллированной водой и просушить в непыльном контейнере при комнатной температуре в течение нескольких дней.В более сложных случаях, особенно для тех камер и предметных стекол, которые подвергались воздействию лекарств, высушенных сред или реагентов клеточной адгезии, блоки можно предварительно очистить, пропитав этанолом или разбавленными растворами кислоты, но такой обработки следует избегать с помощью камер. которые используют клей или другой клей на основе растворителя для прикрепления хрупкого покровного стекла к стеклу, металлу или пластику. После очистки и сушки камеры стерилизуют либо автоклавированием (не рекомендуется), либо обработкой в ​​течение 15 минут ультрафиолетовой лампой в темном шкафу.В качестве экономичной и быстрой альтернативы многие простые инкубационные камеры можно стерилизовать путем промывки этанолом и сушки в стерильном вытяжном шкафу с ламинарным потоком.

Хотя культуры клеток, помещенные на предметные стекла или выращенные в чашках Петри со стеклянным дном, можно временно наблюдать на предметном столике микроскопа при комнатной температуре в течение нескольких минут, было изготовлено множество коммерческих устройств, позволяющих использовать эти простые камеры для получения изображений для более длительные периоды времени. Все эти устройства, названные подогревателями предметного столика или инкубаторами предметного столика , обеспечивают локальное регулирование температуры (см. Рисунок 5), в то время как более совершенные конструкции также позволяют ограниченный контроль атмосферы и содержат возможности для перфузии.Подогревающие пластины для предметных стекол стандартного размера (1 x 3 дюйма; см. Рисунки 5 (a) и 5 ​​(b)) подходят для поддержания контроля температуры в камерах, показанных на рисунке 3, и легко адаптируются к большинству микроскопов, обычно с оригинальные сценические клипы. Подогреватель предметных стекол, показанный на Рисунке 5 (а), имеет металлическую верхнюю пластину, которая полностью охватывает предметное стекло микроскопа внутри обогреваемого отсека. К сожалению, исследуемая область покровного стекла находится в открытом отверстии, которое не нагревается пластиной.Проблема передачи тепла от предметного стекла к образцу усугубляется использованием больших апертур, хотя меньшие области обзора часто создают дополнительные проблемы, затрудняя движение физически больших объективов с большой числовой апертурой. Подогреваемый держатель предметных стекол, изображенный на рисунке 5 (b), разработан для адаптации к стандартному инвертированному микроскопу и имеет меньшую апертуру, что обеспечивает более равномерный контроль температуры образца за счет доступной зоны наблюдения.

Среди наиболее совершенных подогревателей предметных стекол микроскопов является многолуночный инкубатор для предметных стекол, показанный на Рисунке 5 (c), который предназначен для обеспечения строго контролируемой среды (для предметных стекол, аналогичных показанной на Рисунке 5 (f)), которая регулирует pH, температура, перфузия и локальная атмосфера.В инкубаторе используется технология Пельтье для нагрева или охлаждения образца в диапазоне температур от 5 до 50 градусов по Цельсию, и в нем можно разместить до четырех линий перфузии с регулируемой температурой, а также сверхфузию газа. Среди многих уникальных особенностей этой системы инкубатора — магнитное основание для упрощения настройки микроскопа и специально разработанный аспиратор для удаления перфузата с минимальным нарушением уровня жидкости. Нагреватели предметных стекол и инкубатор, изображенные на рисунках 5 (a) — 5 (c), подключены к отдельному блоку управления, который поддерживает температуру и другие необходимые переменные (такие как перфузия и регулирование атмосферы) для каждого устройства.

(см. Рисунки с 5 (d) по 5 (f)) по конструкции и исполнению аналогичны простым нагревателям предметных стекол микроскопа. Самая простая версия, показанная на рисунке 5 (d), состоит из нагретой платформы, которая легко адаптируется к любому инвертированному столику микроскопа и вмещает чашки Петри до 10 сантиметров в диаметре. Прилипшие или взвешенные клетки наблюдаются через центральное отверстие в нагревательной пластине. Даже если клетки, находящиеся непосредственно над отверстием, не нагреваются планшетом и могут испытывать проблемы с жизнеспособностью во время более длительных наблюдений, чашку можно легко повернуть, чтобы переместить соседние области культуры в отверстие для просмотра.В качестве альтернативы, чашки Петри меньшего размера (диаметром 35 или 60 миллиметров) можно более равномерно нагревать и наблюдать с помощью этого подогревателя. Более совершенная конструкция подогревателя чашек Петри с диагональной прорезью вместо круглой апертуры изображена на рисунке 5 (e). Этот инкубатор может использоваться с чашками Петри размером от 60 до 100 миллиметров, а меньшая версия доступна для 35-миллиметровых чашек. Диагональная щель охватывает центральную и периферическую области чашки Петри и может использоваться для исследования практически всей культуры путем медленного вращения чашки во время наблюдения.Ячейки, прилегающие к щели, поддерживаются при правильной температуре, хотя ячейки, расположенные непосредственно над отверстием, подвержены колебаниям из-за температурных градиентов.

6-луночный инкубатор для планшетов, показанный на рис. 5 (f), предназначен для установки на инвертированный микроскоп и обеспечивает полный контроль окружающей среды, что позволяет получать изображения нескольких культур в долгосрочной перспективе. Температура регулируется с точностью до одной десятой градуса Цельсия (которая постоянно контролируется путем сравнения с эталонной скважиной) с помощью системы рециркуляции воды, соединяющей внешнюю термостатически управляемую ванну с камерой.Отдельный блок управления смешивает углекислый газ с воздухом, который затем непрерывно подается в камеру инкубатора, а резервуар для воды внутри камеры служит для обеспечения постоянной относительной влажности. Камера поддерживается многочисленными принадлежностями для размещения как 35-миллиметровых чашек Петри, так и многокамерных предметных стекол (рис. 3 (f)), а также сменных адаптеров для установки от 12 до 96 многолуночных планшетов и камер для одинарного покровного стекла. Эта передовая система полезна для множества применений, от фармацевтических анализов до флуоресцентных наблюдений в широкопольной и конфокальной микроскопии.

Изолированные, открытые чашки Петри и предметные стекла могут также поддерживаться при физиологической температуре или близкой к ней с помощью устройств горячего воздуха, которые похожи и работают аналогично фену (как показано на рисунке 6) или нагревателю инкубатора для яиц. Хотя регулирование температуры ограничено несколькими десятыми градуса Цельсия, даже с применением пропорционального контроллера и удаленного монитора термодатчика, воздуходувка фокусирует поток воздуха непосредственно на культуральную камеру и окружающие части микроскопа (столик, объектив , и конденсатор), чтобы обеспечить быстрое реагирование на температурный дрейф.Кроме того, беспрепятственный доступ к образцу для введения лекарств и смены средств массовой информации. С другой стороны, открытые культуры, выращенные в чашках Петри и нагретые с помощью нагнетателей горячего воздуха, подвержены постепенному изменению pH и осмолярности, поскольку как диоксид углерода, так и вода медленно выделяются из камеры. Это ограничивает использование воздуходувок с открытыми камерами краткосрочными наблюдениями, которые можно провести за несколько часов. Напротив, камеры закрытой системы (обсуждаемые ниже) можно обслуживать в течение гораздо более длительных периодов времени с помощью воздуходувок.Другой недостаток воздуходувок заключается в том, что температура образца постоянно колеблется (даже в узком диапазоне температур), что может привести к смещению фокуса при каждом включении или выключении воздушного потока. Общая стабильность условий культивирования может быть увеличена, а уровень дрейфа снижен путем подсоединения нагнетателя горячего воздуха к шкафу для окружающей среды, который окружает микроскоп. Инфракрасные лампы также использовались для обогрева культур, но они страдают от проблем, аналогичных тем, с которыми сталкиваются воздуходувки.

Большинство нагревательных устройств, показанных на рисунке 5, имеют ограниченные области для наблюдения за живыми клетками (часто всего несколько миллиметров), требующие особого внимания, чтобы обеспечить достаточный зазор для удобного перемещения объектива в пределах апертуры. Современные масляные и водно-иммерсионные объективы с высокой числовой апертурой довольно большие, имеют очень короткие рабочие расстояния и могут быть настолько громоздкими, что сталкиваются с нагревателями, имеющими чрезмерно толстые основания или установленными слишком далеко над предметным столиком микроскопа.Кроме того, способность перемещать смазанный маслом объектив по стеклянной поверхности камеры для культивирования может быть сильно ограничена небольшими отверстиями, имеющимися на многих нагревателях предметных столиков. При выборе нагревателя предметного столика для визуализации живых клеток исследователь должен сравнить апертуру и размеры объектива, чтобы убедиться, что можно наблюдать достаточно большую площадь культуральной камеры.

Некоторые из рассмотренных выше подогревателей предметных стекол и чашек Петри или камер инкубатора (рис. 5) дополнительно оснащены изолирующими прокладками для изоляции нагретой платформы от предметного столика, что снижает потери тепла через теплопроводящие металлические части корпуса микроскопа .В качестве альтернативы эти нагревательные пластины могут быть установлены на тонком (1-2 миллиметра) слое изоляционного листа из пластика или композита для минимизации потерь тепла. Обратите внимание, что столик и рама микроскопа являются отличными проводниками тепла и могут быстро преодолеть ограниченную тепловую способность типичных контроллеров, используемых с нагревательными пластинами. Обычный результат — постепенное снижение температуры (особенно около отверстия), которое влияет на жизнеспособность клеток и делает экспериментальные результаты сомнительными. Еще один важный момент, который необходимо учитывать, касается реальной производительности этих устройств.Хотя чашки Петри и подогреватели предметных стекол обычно имеют отличную регулировку температуры (одна десятая градуса Цельсия) из-за точности их пропорциональных контроллеров, фактическая температура исследуемой области образца часто отклоняется от заданного значения температуры из-за градиента, создаваемого поперек. диафрагма. По этой причине соединение простых нагревателей предметного столика с дополнительными нагревательными устройствами, такими как нагреватели объективов или закрытые камеры окружающей среды, может быть необходимо для обеспечения жизнеспособности клеток во время длительных сеансов визуализации.

Практически все простые камеры для получения изображений, обсуждаемые в этом разделе, не находятся в равновесии с окружающей средой, и их следует ограничивать только очень краткосрочными исследованиями, обычно в диапазоне от нескольких минут до часа самое большее. Хотя специальные чашки Петри со стеклянным дном полезны для ряда экспериментов, камеры, изготовленные из полимеров (фактически, стандартные чашки Петри и колбы для культивирования тканей из полистирола), страдают неоднородными оптическими поверхностями и демонстрируют деформационные дефекты, которые не позволяют использовать передовые методы визуализации, такие как как поляризованный свет и дифференциальный интерференционный контраст.Кроме того, толстые камеры (как пластиковые, так и стеклянные) не позволяют использовать иммерсионные объективы с большой числовой апертурой. Возможно, наиболее пагубным фактором в приложениях, использующих простые камеры, однако, помимо неэффективной передачи тепла, которая происходит между установленными на ступенях нагревательными устройствами и камерой формирования изображения, является постепенное увеличение pH и осмолярности, которое сопровождает медленное испарение среды. В совокупности многие недостатки простых культуральных камер препятствуют их эффективному применению в серьезных экспериментах по визуализации, и исследователям рекомендуется рассмотреть одну из более сложных альтернатив, обсуждаемых ниже.

Перфузионные камеры

Большое разнообразие конструкций камер для культивирования, которые имеются в продаже или могут быть легко построены собственными силами, обычно делятся на две основные функциональные категории. Первый и самый базовый класс, системы с открытой камерой , похожи на чашки Петри и специальные предметные стекла микроскопа, описанные выше, которые во время использования медленно приближаются к равновесию с окружающей атмосферой. Более сложные закрытые камеры герметичны, чтобы защитить клетки от испарения культуральной среды и гарантировать, что переменные окружающей среды, такие как pH, концентрация углекислого газа и осмолярность, остаются неизменными.Система культивирования клеток с открытой камерой обеспечивает легкий доступ к растущим клеткам, что позволяет легко вводить микроинъекцию, зажимать пластырь, добавлять лекарства и метаболиты, менять культуральную среду и другие необходимые манипуляции с клетками. Напротив, закрытые камеры обеспечивают превосходную изоляцию от внешней среды, но значительно затрудняют доступ к ячейкам. Большинство конструкций закрытых камер включают порты, которые позволяют добавлять свежую среду и лекарства во время эксперимента, не прерывая последовательность визуализации.В этих системах перфузия регулируется либо перистальтическим насосом, либо шприцем с приводом от двигателя, либо через манифольд, управляемый силой тяжести. Новые растворы, добавленные в систему с закрытой камерой, должны сначала быть уравновешены до тех же температур и атмосферных условий, что и камера для визуализации. Кроме того, многие клеточные линии чувствительны к сдвигу, поэтому перфузия адгезивных клеток, прикрепленных к покровному стеклу, должна выполняться при очень низких скоростях потока. Некоторые из более совершенных систем закрытых камер, описанных ниже, предназначены для обеспечения жесткого контроля сил сдвига.

Выбор между использованием открытой или закрытой системы культуральной камеры обычно продиктован характеристиками исследования, включая необходимое временное и пространственное разрешение, а также продолжительность. Для получения изображений с высоким разрешением в светлом поле, основанных на DIC, HMC или фазовом контрасте, требуется, чтобы числовая апертура конденсора была равна или больше, чем у объектива. Следовательно, для достижения полного разрешения с объективом 60x с числовой апертурой 1,4 необходимо использовать согласующий конденсор с равной числовой апертурой.Поскольку максимальное рабочее расстояние конденсатора высокого разрешения, работающего при освещении Келера, составляет всего пару миллиметров (в зависимости от рабочего расстояния конденсатора), этот фактор ограничивает физические размеры камеры наблюдения. Системы с закрытыми камерами меньшего размера могут содержать только ограниченные объемы культуральной среды (обычно около нескольких сотен микролитров), что может стать проблемой для долгосрочных культур, если не используется перфузионная система.

Напротив, флуоресцентные исследования, которые не требуют сопутствующих методов проходящего света с высоким разрешением, часто могут выполняться с открытыми камерами, что упрощает задачу смены среды или проведения других манипуляций (таких как электрофизиологические измерения) с культурой.Закрытые камеры также требуют особого внимания к буферной способности культуральной среды, поскольку pH не может контролироваться с помощью типичной системы бикарбонат натрия / диоксид углерода. В качестве альтернативы можно использовать среду, которая забуферена без газа, или следует рассмотреть возможность использования синтетических буферных добавок (например, HEPES ). В любой перфузионной камере различия в показателях преломления между перфузатом, покровным стеклом и иммерсионной средой могут внести значительную ошибку в измерения глубины и привести к ослаблению сигнала.Многие из этих артефактов можно устранить с помощью иммерсионных объективов, но качество изображения по-прежнему остается лучшим в случаях, когда клетки прикреплены к покровному стеклу.

На рисунке 7 показано несколько коммерческих перфузионных камер, предназначенных для экспериментов по визуализации живых клеток с различным оптическим разрешением. Конфигурация, показанная на рисунке 7 (а), представляет собой автономную климатическую камеру, в которой находится чашка Петри, а также возможности для контроля перфузии, температуры и влажности, а также регулирования состава атмосферного газа.На рисунке 7 (b) изображена перфузионная камера в форме ромба (обсуждается ниже) в адаптере нагреваемого столика, а на рисунке 7 (c) показана аналогичная конструкция, но с круглой камерой. Разнообразные вставки ступени проточной камеры для адаптеров на рисунках 7 (b) и 7 (c) позволяют исследователям точно настраивать детали экспериментов по визуализации как для физиологии, так и для клеточной биологии. Перфузионная камера в стиле Людина, показанная на рис. 7 (d), может быть установлена ​​в стойку и может использоваться для визуализации нескольких образцов с перфузией в одном эксперименте.Хотя сама камера не нагревается, ее можно разместить на нагретой пластине предметного столика или использовать вместе с обогревателем объектива или полностью закрытой климатической камерой. Перфузионная камера Петри на рис. 7 (е) имеет отверстия для ввода и вывода перфузионных жидкостей, но не содержит элементов контроля температуры. Точно так же камера на рисунке 7 (f) содержит порты и предназначена для вставки в стандартные 6-луночные планшеты, которые содержат прилипшие клетки на пластиковой поверхности роста.Нагреваемая перфузионная камера, представленная на Рисунке 7 (g), предназначена для установки на предметном столике микроскопа с круглой апертурой и снабжена несколькими портами по периметру центральной лунки. Обратите внимание, что буквально сотни перфузионных камер с живыми клетками коммерчески доступны, поэтому исследователю рекомендуется сканировать доступность камер для конкретных приложений, прежде чем переходить к единой конструкции.

Некоторые из важных соображений при проектировании перфузионных камер — это механическое присоединение (при необходимости) и стабилизация образца, жидкостно-механические характеристики потока и время замены камеры, а также оптическое рабочее расстояние и показатели преломления иммерсионного масла. культуральные растворы и стеклянные чашки, через которые будет происходить наблюдение.Образцы для визуализации живых клеток в закрытых или открытых камерах можно иммобилизовать либо за счет их естественного прилипания к покровному стеклу, с помощью агентов, способствующих адгезии (например, поли-L-лизина и коллагена), либо путем предварительного погружения в тонкий слой агара. Требования исследования будут определять размер площади поверхности стекла в перфузионной камере, которая должна быть доступна для наблюдения. Случайные популяции клеток часто можно использовать с относительно небольшими покровными стеклами, но могут потребоваться гораздо большие площади для очень больших клеток или сетей, а также в ситуациях, когда многие клетки должны быть проверены на предмет определенных событий (таких как митоз).

Независимо от площади поверхности покровного стекла тонкие стеклянные пластинки, образующие полость для образца (в идеале, толщиной 170 микрометров), должны быть без деформации, оптически плоскими и располагаться параллельно. Обратите внимание, что большие области обзора более подвержены утечкам и физическим повреждениям, но обеспечивают значительно больший доступ к объективам с высокой числовой апертурой, которые часто имеют цилиндры диаметром от 3 до 5 сантиметров (и даже более громоздкие с установленным нагревателем).Камеры должны быть построены с использованием компонентов, не токсичных для живых клеток. Современные коммерчески доступные культуральные камеры изготавливаются из стекла, нержавеющей стали, синтетических высокопрочных полимеров, тефлона и силикона, часто с использованием клея во время окончательной сборки. Некоторые из этих материалов могут содержать следы токсичных тяжелых металлов или органических растворителей, которые следует удалить путем тщательной очистки перед стерилизацией и использованием.

обычно необходимы для обеспечения жизнеспособности клеточной культуры, когда исследования требуют длительных последовательностей изображений или если последовательное добавление метаболитов, индикаторов и / или лекарств должно осуществляться без нарушения поля зрения.Кроме того, перфузионные камеры позволяют исследователю периодически отбирать образцы культуральной среды для производства клеточных продуктов и проводить корреляционные исследования, при которых образец контролируется в живом состоянии в течение определенного периода времени с последующей внезапной фиксацией во время наблюдения для реконструкции структурных или цитологических событий. лежащий в основе интересующего процесса. Основными преимуществами перфузии являются способность поддерживать pH и ионную концентрацию среды во время длительных экспериментов, а также возможность введения различных реагентов (вводимых в камеру) без разрушения клеток.Например, перфузия позволяет исследователю вводить лекарство в культуру во время покадровой последовательности, не прерывая получение изображения.

Одной из наиболее важных особенностей перфузионной камеры является то, что общая конструкция должна включать характеристики ламинарного потока, чтобы раствор, проходящий через нее, можно было быстро и эффективно обменивать с относительно небольшим перемешиванием. Для некоторых исследований ламинарный поток может не иметь критического значения, но более тщательные исследования часто требуют строго контролируемого обмена средой, особенно при добавлении других агентов.Жидко-механические свойства перфузионной камеры тесно связаны с геометрией (как показано на рисунке 8). Ламинарный поток возникает, когда поперечное сечение камеры очень похоже или даже идентично поперечному сечению впускной трубы. Наиболее неблагоприятные схемы потока возникают, когда камера больше по сравнению с входной трубкой. На рисунке 8 сравниваются схемы потока в нескольких популярных перфузионных камерах. Круглая камера, показанная на рисунке 8 (а), имеет плохие характеристики обмена из-за внезапного расширения среды из отверстия впускной трубы, что приводит к вторичному потоку и неравномерным линиям тока.Постепенное расширение, как показано на рисунках 8 (b) и 8 (c), приводит к более однородным линиям тока и быстрому обмену. Сужающиеся области на входных и выходных трубках конструкции камеры, показанной на Фигуре 8 (b), улучшают профиль потока, в то время как ромбовидная геометрия камеры на Фигуре 8 (c) приводит к более равномерному потоку через сосуд. Камера микроакведука, представленная на рисунке 8 (d), имеет превосходные характеристики ламинарного потока из-за протравленного канала, который мягко направляет среду через образец.

Как обсуждалось выше, часто бывает необходимо разработать надежный метод перфузии клеток непосредственно в их камере для визуализации, не мешая эксперименту с точки зрения сбора электрических, химических или оптических данных. Поток жидкости через перфузионную камеру происходит за счет обмена новой жидкостью, проходящей во входное отверстие, которая, в свою очередь, вытесняет отработанную жидкость через выхлопное отверстие.Поскольку большинство камер для визуализации живых клеток содержат относительно небольшие объемы среды для культивирования тканей, чувствительность клеток к сдвиговым напряжениям во время перфузии, а также возможность создания вибраций покровного стекла на апертуре (часто упоминается как эффект диафрагмы ) необходимо учитывать при выборе насосной системы. Во многих случаях этот процесс отбора, как и большинство других факторов при визуализации живых клеток, включает один или несколько компромиссов. Идеальный перфузионный насос будет обеспечивать строго контролируемый чисто аналоговый поток среды в течение неопределенного периода времени, но этот тип системы еще предстоит разработать.

Стандартными методами доставки жидкостей посредством перфузии являются гравитационный поток, автоматическая или ручная инъекция с использованием шприца (см. Рисунок 9 (b)) и механические насосы. Гравитационный поток прост в установке и относительно недорог, но его трудно контролировать при скорости потока, обычно необходимой для микроскопии. В самой базовой конфигурации система гравитационной подачи требует большого резервуара со средой, расположенного высоко над микроскопом, с секцией стерильной трубки, соединенной с камерой формирования изображения.Скорость потока регулируется игольчатым клапаном, управляющим выхлопной трубой, прикрепленной к противоположной стороне камеры, которая стекает в сборный бассейн. В качестве альтернативы, скорость перфузии в гравитационной системе можно контролировать, изменяя расстояние по вертикали между двумя резервуарами или запорный кран, который контролирует поток из верхнего резервуара. Характеристики ламинарного потока систем гравитационной подачи часто менее чем адекватны, но их будет достаточно в ситуациях, когда основным требованием является возможность быстрой замены питательной среды.

Для экспериментов, основанных на точном добавлении лекарств или других химикатов, а также на превосходном контроле явных сил на поверхности покровного стекла (где прикрепляются клетки), необходим более сложный перфузионный аппарат. Скорость обмена жидкости, которая может быть чрезвычайно важной в специализированных экспериментах, увеличилась с улучшением геометрии камеры. В перфузионных камерах были достигнуты полупериоды для обмена жидкости менее 50 миллисекунд без нарушения бокового положения образца или аксиальной фокальной плоскости.Ступенчатое изменение концентрации может быть достигнуто менее чем за 100 миллисекунд при относительно низкой линейной скорости потока, когда стык двух перфузионных растворов расположен близко к камере, при условии, что камера имеет небольшой внутренний объем и предназначена для поддержания ламинарности. профили потока. Многие из имеющихся в продаже современных перфузионных камер соответствуют этим критериям.

Периодическое добавление факторов роста, ингибиторов, лекарств и других метаболитов во время перфузии может быть легко выполнено с помощью ручных шприцев.Механические насосы, доступные в перистальтическом (рис. 9 (a) и 9 (b)) или моторизованном шприце (рис. 9 (e)), являются наиболее надежными устройствами для доставки перфузата. Шприцевой насос ограничен по объему для длительных экспериментов и может изменяться в объеме подачи в микролитровом масштабе (из-за временного заедания поршня). Насосы, использующие шаговые двигатели, могут иметь очень низкую скорость потока, но мгновенное движение ротора приводит к гидродинамическим импульсам, которые могут вызвать изгиб покровного стекла или смещение клеток.Усовершенствованные перфузионные насосы оснащены регулируемыми двигателями постоянного тока, соединенными с понижающей трансмиссией, приводящей в движение валковый шпиндель, оборудованный регулятором скорости. В результате профиль потока свободен от внезапных пульсаций, типичных для более дешевых перистальтических насосов. При выборе системы доставки перфузии исследователь должен учитывать желаемую скорость потока, равномерность потока в различных временных масштабах и общий доставленный объем, а также качество потока.

Помимо обеспечения подходящих характеристик потока жидкости в перфузионной камере, питательные растворы также могут требовать внимания в отношении температуры и состава газа.Если используется буферная система из диоксида углерода и бикарбоната, все перфузионные растворы должны оставаться уравновешенными с соответствующим парциальным давлением диоксида углерода (в зависимости от концентрации бикарбоната) и поддерживаться при той же температуре, что и в камере для культивирования. Таким образом, перфузионные растворы необходимо газировать и регулировать их температуру перед их введением в перфузионную камеру. Обратите внимание, что растворимость диоксида углерода уменьшается с повышением температуры, поэтому растворы должны газироваться при заданной температуре камеры или газовая смесь должна быть отрегулирована с учетом разницы температур.Доступно разнообразное коммерческое оборудование для поддержания температуры перфузионного раствора и состава газа. В качестве альтернативы подходящие устройства могут быть легко сконструированы собственными силами с использованием обычных лабораторных компонентов. Простые камеры влажности могут быть изготовлены из бутылки с носителем, трубок и воздушного камня для аквариума (рис. 9 (c)), а температуру можно контролировать с помощью циркуляционной водяной бани или настольного инкубатора. Более сложные устройства (показаны на рисунке 9 (d)) предназначены для одновременного регулирования как pH, так и влажности.Поскольку статические растворы сред имеют тенденцию к охлаждению и потере углекислого газа (что приводит к увеличению pH), все растворы должны быть подключены к перфузионной камере с помощью газонепроницаемой трубки, которая проходит через нагретую водяную баню или инкубатор.

Выбор соединителей трубок для экспериментов по перфузии живых клеток должен быть ограничен теми продуктами (желательно имеющими сертификат USP Class VI), которые демонстрируют максимальную степень биосовместимости, что гарантирует отсутствие токсичности трубок во время сеансов визуализации.В настоящее время существует три разновидности коммерческих трубок, отвечающих этому требованию: PharMed (доступны у многочисленных дистрибьюторов), Tygon 2275 и C-Flex. Несмотря на то, что он хорошо подходит для культивирования клеток, основным недостатком трубки PharMed является низкая непрозрачность, которая снижает видимость перфузата, проходящего через трубку. В результате трудно обнаружить пузырьки, которые могут образовываться при прохождении перфузата по трубке. Напротив, трубки C-Flex и Tygon почти прозрачны и не склонны к вымыванию пластификаторов в перфузат.Последние продукты идеально подходят для большинства перфузионных экспериментов.

Потенциальная проблема при использовании перфузионных камер заключается в том, что образец часто отскакивает не в фокусе, поскольку покровное стекло сгибается в ограниченной степени, когда процесс проталкивания жидкости через камеру начинается или прекращается, как обсуждалось ранее (эффект диафрагмы).Этот артефакт очевиден в камерах, где система перфузии плохо контролируется. Сгибание покровного стекла может не представлять серьезных проблем в тех случаях, когда последовательность захвата изображения может чередоваться между сеансами перфузии, но это может серьезно повлиять на те исследования, которые требуют относительно высокого временного разрешения (2 секунды или меньше). Степень изгиба покровного стекла можно свести к минимуму, уменьшив диаметр входного порта (и соединителей трубок) по сравнению с диаметром выходного отверстия, чтобы гидростатическое давление не накапливалось во время потока жидкости.Кроме того, замена перистальтического насоса системой гравитационного потока может уменьшить или устранить эффект диафрагмы.

Основной проблемой при использовании всех перфузионных камер является образование пузырьков воздуха (из-за утечек, сил поверхностного натяжения и дегазации), которые могут мешать ламинарному потоку культуральной среды, а также уменьшать контрастность и резкость во время визуализации. Правильно сконфигурированная перфузионная камера должна образовывать замкнутую систему, и скрытые утечки воздуха или возможные утечки в камере или в местах соединения трубок должны быть устранены после установки образца на микроскоп, но до начала эксперимента.В гравитационных системах самый простой способ удалить пузырьки — заполнить резервуары и камеру, остановить поток через систему, а затем медленно продуть запорный кран, исследуя все компоненты. Камеры, в которых используется насосная система, обычно труднее исправить, и следует уделять особое внимание мельчайшим пузырькам, которые могут скрываться в корпусе камеры между покровным стеклом и портами перфузии. Во всех случаях вся система должна быть полностью закрыта и заполнена жидкостью перед первой перфузией, чтобы свести к минимуму сгибание покровного стекла при начале и завершении перфузии.Убедитесь, что выхлопная труба погружена в уловитель, чтобы пузырьки не попадали обратно в камеру.

Для многих исследований расположение входных и выходных отверстий перфузионной камеры не должно мешать смене объективов микроскопа. Большинство камер типа «сэндвич» сконструированы таким образом, что порты расположены на одном или противоположных краях камеры и часто могут использоваться как с вертикальными, так и с инвертированными микроскопами. Однако камеры с портами, установленными в верхней части корпуса, могут препятствовать перемещению турели объектива на вертикальных микроскопах.Многие из современных коммерческих перфузионных камер (см. Рисунки 1 и 7) предназначены для обеспечения полного вращения турели микроскопа без препятствий, но этот фактор следует сначала проверить, прежде чем выбирать конкретную камеру. Кроме того, пластиковые камеры для перфузии и формирования изображений, которые встроены в большие металлические адаптеры для столиков инвертированных микроскопов, могут не обеспечивать достаточный зазор для вращения объектива без предварительного опускания объектива в сторону от камеры.

Хотя подавляющее большинство исследований по визуализации живых клеток требует поддержания культуры при температурах, превышающих температуру окружающей среды, некоторые исследования включают наблюдения за организмами, которые необходимо выращивать при очень низких температурах, в то время как другие изучают влияние внезапного охлаждения на образец. .Для длительных экспериментов микроскоп в идеале должен располагаться в холодном помещении, чтобы избежать проблемы конденсации воды, которая образуется на холодных поверхностях при комнатной температуре. При отсутствии холодного помещения в продаже имеются перфузионные камеры, предназначенные для охлаждения. Эти устройства часто полагаются на поток охлажденных спиртовых растворов через предварительно намотанные линии или трубки для снижения температуры. Чтобы избежать нагрева образца этими элементами микроскопа, могут потребоваться специальные охладители объектива и конденсатора, а также можно предотвратить образование инея, покрывая внешние стеклянные поверхности химическим веществом, аналогичным Photo-Flo (Kodak).Однако, независимо от требований к температуре исследования, следует отметить, что поддержание точного значения температуры часто не так важно, как постоянное достижение и постоянное поддержание постоянной температуры.

Расширенные камеры для визуализации закрытых и открытых систем

В общем, инвертированные микроскопы ( культур тканей ) являются наиболее распространенными инструментами, используемыми для визуализации живых клеток, но вертикальные микроскопы также могут быть адаптированы для этой цели с некоторыми важными уступками.Исследователь должен проявлять осторожность при планировании эксперимента (независимо от конфигурации рамки микроскопа), определяя необходимый диапазон увеличения, ограничения рабочего расстояния и оптимальную числовую апертуру, все из которых связаны с глубиной резкости. В большинстве случаев объективы с жидкостной связью (масляная и водная иммерсия) выигрывают от контроля температуры при использовании с культурами клеток млекопитающих. В применениях в проходящем свете, требующих конденсора с высокой числовой апертурой, камера должна быть способна приспособиться к рабочему расстоянию, физическому размеру и близости передней линзы конденсатора, особенно при смазке стеклом верхней камеры.Геометрия предметного столика микроскопа также должна соответствовать размерам культуральной камеры, чтобы обеспечить достаточный зазор. Как правило, инвертированные микроскопы лучше подходят для исследования живых клеток из-за более длинных рабочих расстояний конденсаторов и способности этих инструментов использовать объективы с высокой числовой апертурой непосредственно на оптической поверхности, поддерживающей клетки.

При использовании современных систем культивирования в открытых камерах необходимо учитывать ряд переменных.В частности, необходимо учитывать объем, размер апертуры, конструкционный материал, толщину покровного стекла, геометрию камеры и биосовместимость. Другие факторы, которые могут повлиять на успех эксперимента, включают испарение (и конденсацию), окружающий свет, угол обзора и условия окружающей среды в лаборатории. Для сложных камер закрытой системы применимы многие из тех же соображений; однако важны и дополнительные характеристики. К ним относятся требования к фиксированному или изменяемому объему камеры, расстояние между оптическими поверхностями, скорость обмена жидкости, ламинарность, напряжение сдвига, градиенты перфузионного потока и геометрия канала потока.Кроме того, для обеих систем важными факторами являются контроль температуры (и однородность), а также тепловой эффект масляных или водных иммерсионных объективов.

Закрытые камеры для визуализации живых клеток необходимы в ситуациях, когда культура должна быть полностью изолирована от внешней среды, или в приложениях, использующих передовые методы повышения контрастности для просвечивающей оптической микроскопии (например, ДИК высокого разрешения). В этих случаях клетки помещают в перфузируемую оптическую полость с регулируемой температурой или выращивают непосредственно на покровном стекле, которое образует нижнее оптическое окно камеры.На рынке имеется широкий выбор традиционных и усовершенствованных конфигураций послепродажных камер для камер визуализации закрытых систем. Подавляющее большинство этих конструкций используют аналогичные характеристики обеспечения двух оптических поверхностей, разделенных перфузионным кольцом, уплотненным прокладками, чтобы сформировать сэндвич, который скреплен вместе в металлическом или полимерном корпусе. К недостаткам, обнаруженным во многих системах с закрытыми камерами, относятся чрезмерное разделение оптических поверхностей, фиксированный объем оптической полости, длительные скорости обмена жидкости, турбулентная перфузия, трудности с загрузкой и утечки.Ниже описаны некоторые из более совершенных камер формирования изображений открытых и закрытых систем, предназначенных для решения общих проблем и обеспечения превосходных характеристик изображения.

Камера открытой системы Bioptechs Delta T

Система культуральной камеры Bioptechs Delta T отличается рядом инновационных дизайнерских решений, которые могут быть использованы с удивительным преимуществом для широкого спектра статических и перфузионных экспериментов по визуализации живых клеток. Созданная по образцу традиционных чашек Петри с открытой камерой, камера для культивирования Delta T состоит из 35-миллиметровой чашки, соединенной с 170-микрометровым покровным стеклом, охватывающим все дно, и использует технику теплопередачи первой поверхности для поддержания контроля температуры (показано на рисунке 10). ).Стратегия терморегулирования основана на тонкопленочном покрытии из оксида индия-олова ( ITO ), прозрачном, электропроводящем слое, нанесенном на нижнюю поверхность покровного стекла. Проводящие контакты, расположенные на противоположных краях покровного стекла, входят в контакт с рядом электродов, когда блюдо правильно установлено в специализированном адаптере предметного столика. Температура регулируется с помощью контура обратной связи термистора (размещенного во внешнем блоке управления), который подает электрический ток к покрытой нижней стороне покровного стекла, тем самым нагревая всю посуду до желаемой температуры.Температурный отклик при использовании этого метода составляет около 0,1 градуса Цельсия в секунду.

Быстрое время отклика системы Delta T позволяет контроллеру включать и выключать ток в течение нескольких секунд, что позволяет компенсировать изменения температуры, которые происходят в чашке из-за испарения с поверхности, энтропии или перфузии. В сочетании с быстрым временем отклика работает высокоскоростная цепь безопасности, предназначенная для защиты ячеек в случае ошибки контроллера. Система обеспечивает возможность получения изображений с высоким разрешением благодаря равномерной стеклянной поверхности без деформаций и доступна с различной толщиной покровного стекла, включая номер 1.5, предназначенное для приложений с большой числовой апертурой. Среда чашки совместима с популярными режимами повышения контрастности светлого поля, темного поля, поляризованного света, фазового контраста, DIC, HMC, флуоресцентной, многофотонной и конфокальной микроскопии.

Представленная в 1993 году технология теплопередачи первой поверхности с использованием тонкопленочного покрытия покровного стекла обеспечивает основу для широкого спектра адаптаций и вариаций основного принципа.Например, Delta T и подобные системы полезны для контроля температуры во время исследования образцов тканей, которые могут быть подвешены в оптической плоскости на соответствующем фокусном расстоянии от объектива. Кроме того, можно легко установить адаптеры для поддержания перфузии малого объема в течение продолжительных периодов времени. Плотно прилегающая крышка также доступна для чашек Delta T для использования в экспериментах с высокой числовой апертурой для определения оптической поверхности над образцом, которая полностью заполнена средой или буфером для визуализации.Это устройство устраняет границу раздела между воздухом и поверхностью материала, тем самым предотвращая сдвиги в контрасте изображения, которые возникают в результате незначительных колебаний объема материала над объективом. Кроме того, электрически нагреваемая, оптически прозрачная крышка из покровного стекла может использоваться для экспериментов по флуоресценции с малым увеличением или с большим увеличением. Терморегулятор покровного стекла крышки предотвращает образование конденсата на нижней поверхности. Кроме того, добавление газового порта позволяет использовать нагретую крышку для поддержания концентрации диоксида углерода в культуральной атмосфере в течение продолжительных периодов времени.Охлаждение образцов с помощью системы Delta T может быть достигнуто путем погружения в чашку спиральной трубки, содержащей рециркулирующий хладагент.

Камера закрытой системы Bioptechs FCS-2

Представляя уникальную технику перфузии, управляемую микроакведуком, камера для культивирования закрытой системы Bioptechs FCS-2 представляет собой передовое решение многих трудностей, с которыми обычно сталкиваются с напряжением сдвига и геометрией потока в перфузионных камерах. В этой системе камера наблюдения микроакведука изготавливается путем включения перфузионных канавок в одну из поверхностей, определяющих оптическую полость (см. Рисунки 1 (b), 8 (d) и 11 (b)).Эта конструкция устраняет перфузионное кольцо, обычное для многих других камер, за счет создания оптической полости только с одной прокладкой, отделяющей перфузионное стекло от покровного стекла. Физическая конфигурация канавок микроакведука обеспечивает превосходную область ламинарного потока в оптической полости, в то время как конструкция с одной прокладкой позволяет исследователю определять размер, объем, толщину и форму камеры. Кроме того, перфузионная камера микроакведука обеспечивает вход и выход потока с большой апертурой, что сводит к минимуму проблему скорости объемного обмена.Чтобы еще больше повысить производительность камерной системы FCS-2, к стеклу микроакведука применяется метод теплопередачи первой поверхности (описанный выше), что обеспечивает тепловую однородность камеры даже в периоды отсутствия потока. Таким образом, культура клеток безопасно поддерживается в оптической среде с регулируемой температурой, совместимой со всеми режимами оптической микроскопии.

Инкубатор Tokai Hit Stage

Продаваемый под различными торговыми наименованиями и конфигурациями несколькими крупными производителями микроскопов, верхний инкубатор Tokai Hit (модель INU ) представляет собой комбинированную систему, которая может использоваться как перфузионное устройство или как статическая камера для моделирования условия, найденные в инкубаторе с увлажненным диоксидом углерода (проиллюстрировано на рисунке 11 (а)).Высокий уровень влажности поддерживается с помощью круглого резервуара с подогревом для воды, оснащенного инжекторами углекислого газа, питаемого от удаленной газосмесительной установки. Покровное стекло апертуры конденсатора нагревается за счет покрытия первой поверхности для предотвращения образования конденсата, позволяя применять методы дифференциального интерференционного контраста в проходящем свете и изображения поляризованного света при низкой числовой апертуре. Порты доступа в покровном стекле позволяют вводить метаболиты и лекарства во время сеанса получения изображения.Камера оснащена перфузионными принадлежностями и антидрейфовой пластиной, расположенной над вставкой нагреваемого предметного столика, чтобы изолировать культуральную чашку от нагревательных элементов, тем самым минимизируя смещение фокуса. Дополнительный нагреватель объектива можно использовать с иммерсионным объективом для поддержания температуры образца. Для наиболее популярных коммерческих микроскопов доступны различные конструкции камер и газовых смесителей.

Самый полный коммерческий пакет камер для визуализации произведен Warner Instruments, специалистами по инструментам для исследований электрофизиологии и клеточной биологии.Компания предлагает потрясающий набор камер для обработки изображений и записи, адаптеров для столиков (см. Рисунок 7 (c)), контроллеров температуры, перфузионных систем, обогревателей объективов, датчиков разлива и проточных перфузионных нагревателей, разработанных для широкого спектра применений. Кроме того, по мере того, как получение изображений живых клеток становится все более популярным методом в лабораториях клеточной биологии, производители вторичного рынка будут постоянно внедрять все больше инновационных архитектур культуральных камер, предназначенных как для перфузии, так и для статического культивирования.Прежде чем переходить к конкретной коммерческой системе камер для визуализации живых клеток, исследователю рекомендуется внимательно ознакомиться с обширной онлайновой и опубликованной научной литературой.

— The Culinary Pro

Тарелка должна вовлекать чувства и втягивать в себя посетителя так же, как картина привлекает наблюдателя. Блюдо должно быть тщательно спланировано, чтобы сбалансировать вкусов , текстур , цветов и способов приготовления .Переплетите компоненты, чтобы создать ощущение композиции и гармонии. Процесс начинается с включения лучших и самых свежих ингредиентов, выполнения точных нарезок ножом и использования точных методов приготовления, которые подчеркивают качество еды и таланты шеф-повара. Блюдо объединяется соусами и другими дополнительными ингредиентами. Последний штрих — разумное использование гарниров. Каждый элемент должен присутствовать по какой-то причине, добавляя аромата, текстуры и цвета, которые гармонируют с готовой тарелкой.

Главный элемент обычно является центром пластины. В пикантном блюде это часто белок, такой как мясо, рыба или птица, который требует навыков разделки мяса, контроля порций и высочайшего уровня техники приготовления для достижения желаемых результатов, необходимых для успешной презентации тарелки. В вегетарианских блюдах часто используются макаронные изделия, ризотто, злаки и бобовые, которые являются деликатными блюдами, которые после приготовления и подачи на тарелку необходимо сразу же подавать, чтобы сохранить их свежесть.Закуски, включая супы, салаты, мясные закуски или небольшие общие тарелки, следует подавать с осторожностью и точностью для максимального визуального эффекта. Свежая, хрустящая, яркая зелень салата с красивыми гарнирами, супы правильной консистенции и украшений, а также точно приготовленные и нарезанные мясные закуски важны для начала трапезы. Десерты, как заключительная глава обеденного опыта, должны включать свежие, насыщенные и сладкие вкусы с текстурным разнообразием, включая печенье, корочки и гарниры, яркую цветовую вариацию из-за использования фруктов, трав и соусов и визуальную привлекательность.Правильное исполнение требует хрустящей текстуры теста, гладкой кремообразной консистенции джелато или мусса и ярких гарниров из трав. Для закусок и десертов, которые служат подставкой для еды, может быть один или несколько узлов, и в этом случае креативная сервировка даст наилучшие результаты.

Упрощение приема пищи одной рукой с адаптивными тарелками и защитными решетками

Многие люди с артритом и другими ограничениями кистей и рук вынуждены использовать практически одну руку, чтобы поесть за обеденным столом.Действительно, у многих есть одна хорошая рука, а другая может быть слабее. Принять пищу одной рукой сложнее, чем кажется, поскольку посуда имеет тенденцию бесконтрольно скользить по столешнице. Даже еда сама по себе скользит по тарелке, из-за чего вам будет сложно вычерпать или наклеить ужин. Когда вы не можете использовать другую руку, чтобы держать блюдо на месте, все становится утомительно.

Конечно, мы продаем много адаптивных продуктов для использования на кухне и в столовой, но особенно удобными, когда дело доходит до этой проблемы, являются наши адаптивные тарелки и миски.С этими блюдами вам будет легче есть одной рукой. Просто решите, какую из следующих стратегий вы предпочитаете.

Приподнятый край облегчает черпание

Пластина для лопатки GripWare

Во-первых, это пластины с приподнятым краем, что делает его очень удобным черпать. Например, GripWare Scooper Plate представляет собой простую белую пластину с высокой изогнутой стенкой с одной стороны для облегчения черпания. Этот высокий край заменяет вашу вторую руку, позволяя подтолкнуть еду к краю, не ударив при этом случайно о стол и не создав беспорядок.

Присоски для дополнительной устойчивости

Лопатка для столовой посуды Freedom с присоской

В то время как пластина-совок GripWare оснащена резиновыми нескользящими ножками для удержания его на месте, мы также продаем сверхустойчивую пластину-черенок Freedom для посуды с присоской. Эта тарелка изготовлена ​​с запатентованной вакуумной системой, которая надежно прилегает к столу и предотвращает опрокидывание вашего блюда, если вы случайно по нему ударите.

Храните пищу отдельно с помощью глубокой перегородки

Черпак с перегородками

Еще одна стратегия еды — использовать тарелки с разделенными секциями.Многие люди, у которых возникают проблемы с кормлением, обнаруживают, что разделенные на перегородки тарелки, подобные тем, которые используются на вечеринках, облегчают собирание еды. Еще лучше, чем обычная тарелка для вечеринок, — это наша разделенная на разделы черпая тарелка, глубина которой составляет 1 1/2 дюйма.

Используйте любую пластину с правой защитной пластиной

Очень большая прозрачная пластина

Однако, возможно, вы захотите использовать свою тарелку, особенно те прекрасные праздничные тарелки, которые мы все время от времени собираем. Стратегия для этого будет заключаться в том, чтобы опробовать одну из наших защитных пластин, которые подходят для любой пластины, если вы подходите по размеру.Например, Extra Large Clear Plate Guard подходит для больших тарелок и, как и тарелки с черпаком, обеспечивает незаметную стену, к которой можно прижать пищу.

Простой способ предотвратить скольжение тарелки

Колодки круглые 8 дюймов Dycem

Если у вас есть проблема со скольжением тарелки по столу, особенно с маленькими блюдцами и мисками для мороженого, 8-дюймовые круглые тарелки Dycem представляют собой резиновые коврики, специально разработанные для удержания этих предметов на месте.

Вы чувствуете, что едите, связав одну руку за спиной из-за физических ограничений.Эти предметы позволят вам снова с легкостью поесть.

Розовые блюда для соуса Huihuger Ktichen Креативная керамическая тарелка из листьев Кухня Многоцелевые блюдца для соуса Блюдца Посуда и сервировочные элементы organideia.pt

Huihuger Ktichen Тарелки для соуса, Креативная керамическая тарелка из листьев Многофункциональная тарелка для соуса (розовая): Кухня и дом. Тарелки для соуса Huihuger Ktichen, Креативная керамическая тарелка из листьев Многофункциональная тарелка для соуса (розовая): Кухня и дом. Цвет: розовый。 Размер: прибл.10,5 * 6,5 * 3,5 см。 Материал: фарфор。 Прочный, простой в использовании, удобный。 Уникальный дизайн продукта, обогатите потребности вашей семьи。 Цвет: розовый Размер: прибл. 0,5 * 6,5 * 3,5 см Материал: фарфор Прочный, легкий в использовании, удобный Уникальный дизайн продукта, обогатите потребности вашей семьи Примечание: 。Поскольку указанный выше размер измеряется вручную, фактический размер полученного вами товара может немного отличаться от размера, указанного выше. Из-за световых эффектов, настроек яркости / контрастности монитора и т. д. могут быть небольшие различия в цветовом тоне изображений и самого элемента.。Пакет в комплекте: 。Керамическая тарелка x。。。。

Розовые блюда для соуса Huihuger Ktichen Креативная керамическая тарелка из листьев Кухня Многоцелевое блюдо для соуса

BOJU Современный бежевый трансформируемый диван-футон 2-местный Гостиная Двухместный диван-кровать Friheten Sleeper Диван для взрослых Общежитие Спальня Офис Приемная. Нескользящий коврик для ванной Детский малыш 27 x 15 дюймов Детский автомобиль Мультяшный животный коврик для душа Детский коврик для ванной Противоскользящий коврик для душа Устойчивый к плесени Антибактериальные моющиеся коврики для ванной для младенцев.5×7 дюймов, белые рамки для фотографий из МДФ RPF04WT, без коврика Набор рамок для фотографий SONGMICS из 2-х A4 21×29,7 см с матовым стеклом спереди 13×18 см Для дома и офиса, HOMESCAPES Лазурно-голубой кубический табурет на золотых металлических ножках Современный модный квадратный пуф Обитый стул на декоративных элементах Золотые ножки Мути-функциональное кобальтово-синее оттоманское сиденье для стула высотой 30 см. Чаша для кухни Decor And Go, 15 см, золото, стеклянные кухонные ящики и подносы, коллекция Gold. Tom Dixon Brew Stove Top Coffee Maker из полированной стали с медным покрытием. Эспрессо-чайник. Медный дизайн в стиле ар-деко.Доска для резки и покрытия Kesper из бежевого дерева 56 x 50 x 4 см, без специй, пластик. Небеленая бумага в пакетиках для самонаполнения.